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核酸检测试剂耗材的质量如何影响检测结果的准确性?

核酸检测试剂耗材的质量对检测结果的准确性有着至关重要的影响,具体体现在以下几个方面:

核酸提取试剂

  • 磁珠或硅胶膜质量:磁珠法核酸提取试剂中,磁珠的吸附性能若不稳定,可能导致核酸吸附不充分或洗脱不完全,使提取的核酸量不足或纯度不高。柱提法中的硅胶膜若对核酸的结合能力不佳,同样会影响核酸的回收率,进而使后续检测信号减弱,出现假阴性结果。
  • 裂解液和洗脱液成分:裂解液若不能有效裂解细胞或病毒,会使核酸释放不充分,影响提取量。洗脱液的 pH 值、离子浓度等若不合适,可能导致核酸在洗脱过程中变性或降解,降低核酸质量,干扰后续 PCR 扩增等检测步骤。

PCR 扩增试剂

  • Taq 酶活性:Taq 酶是 PCR 扩增的关键酶,其活性不稳定或活性过低,会使 DNA 合成效率降低,无法对目标核酸进行有效扩增,易产生假阴性结果。若 Taq 酶存在非特异性扩增活性,则可能导致非目标序列被扩增,出现假阳性结果。
  • 引物和探针特异性:引物和探针若与目标核酸序列的匹配度不高,特异性不强,可能会与其他非目标序列结合,引发非特异性扩增或杂交,导致检测结果不准确。此外,引物和探针的浓度、纯度也会影响扩增效率和特异性,浓度过高或过低都可能导致假阳性或假阴性结果。
  • dNTP 和缓冲液质量:dNTP 的纯度和质量不佳,可能含有杂质影响 DNA 合成。缓冲液的 pH 值、离子浓度等参数若偏离最佳范围,会影响 Taq 酶的活性和 DNA 的稳定性,进而影响 PCR 扩增的效率和特异性,导致检测结果不准确。

采样管

  • 保存液成分:保存液的配方和质量直接影响样本中核酸的稳定性。如果保存液不能有效抑制核酸酶的活性,或者其成分对核酸有破坏作用,会使样本中的核酸在保存和运输过程中发生降解,导致检测结果出现假阴性。
  • 采样管材质:采样管的材质若对核酸有吸附作用,会使样本中的核酸损失,影响检测的灵敏度。此外,材质的密封性不好,容易导致样本泄漏或受到外界污染,从而影响检测结果的准确性。

离心管

  • 材质和质量:离心管若材质不均匀或质量不佳,在高速离心过程中可能会破裂,导致样本损失。而且,某些材质可能会释放出杂质,对核酸产生吸附或干扰作用,影响核酸的纯度和后续检测。
  • 规格和适配性:不合适的离心管规格可能导致离心力分布不均匀,影响核酸沉淀的效果,进而影响核酸的提取质量。如果离心管与离心机不匹配,也会影响离心效果,导致核酸提取不完全或纯度不高,最终影响检测结果的准确性。

PCR 反应管

  • 导热性能:PCR 反应需要精确的温度控制,如果反应管的导热性能不佳,会导致反应体系温度不均匀,使 PCR 扩增效率降低或出现非特异性扩增,影响检测结果的准确性。
  • 密封性:反应管密封性不好,在 PCR 反应过程中容易出现液体蒸发、漏液等情况,导致反应体系的体积和成分发生变化,影响扩增效果,甚至可能造成交叉污染,出现假阳性结果。

吸头

  • 精度和准确性:吸头的精度不准确,如实际吸取的液体体积与设定体积不符,会导致试剂和样本的加入量不准确。这会使 PCR 反应体系中各成分的比例失调,影响扩增效率,进而导致检测结果不准确。
  • 材质和洁净度:吸头材质若会吸附核酸或其他试剂成分,会造成样本损失或试剂浓度改变。同时,吸头若不洁净,含有杂质或核酸酶等污染物,可能会对样本造成污染或降解核酸,影响检测结果的准确性。

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