聚合酶链式反应原理及步骤：从变性到延伸，一文看懂 PCR

一文读懂聚合酶链式反应原理与标准 PCR 步骤，含反应体系配方、温度循环参数，附华晨阳高保真 PCR 酶免费试用。

什么是聚合酶链式反应？

聚合酶链式反应（PCR）是分子生物学最核心的DNA扩增技术，能在数小时内将特定DNA片段扩增百万倍。华晨阳医疗研发的高保真PCR聚合酶，可将这一过程的错误率降至2×10⁻⁶ bp/循环，为基因检测、病原体诊断等提供可靠工具。

PCR 原理：变性-退火-延伸三阶段

PCR通过温度循环实现DNA扩增，包含三个阶段：

1. 变性：95 ℃ 30 s，双链DNA解旋为单链；
2. 退火：55–65 ℃ 30 s，引物与模板特异性结合；
3. 延伸：72 ℃ 1 min/kb，DNA聚合酶合成新链。

🔄 循环次数：通常25–35轮，产物呈指数增长（2ⁿ）。

标准 PCR 反应体系与配方

以25 μL经典体系为例：

💡 华晨阳优化方案：预混Mastermix可减少加样误差。

PCR 温度循环参数优化

关键参数调整指南

🌡️ 仪器校准：建议定期验证PCR仪孔间温度差异（应<0.5 ℃）。

PCR 实验步骤流程图

1. 准备冰浴：酶、dNTPs等热敏感组分现用现取；
2. 配制Mix：按反应体系混合（最后加酶）；
3. 设置程序：参考模板长度设计循环参数；
4. 电泳检测：取5 μL产物，2%琼脂糖凝胶验证。

常见问题与故障排查

无扩增产物？检查这些环节

• 模板质量：OD260/280应为1.8–2.0；
• 引物设计：避免二聚体（可用NCBI Primer-BLAST验证）；
• 酶活性：华晨阳Taq酶-20 ℃保存2年活性>90%。

条带模糊？

• 降低Mg²⁺浓度（1.5–2.5 mM梯度优化）；
• 缩短延伸时间（避免非特异性延伸）。

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本文数据基于实验室测试，实际结果可能因实验条件而异。