HCY™ BloodDirect PCR Kit聚合酶

产品名称】
HCY™ BloodDirect PCR Kit

【产品货号】
E0062K101

名称	规格	型号	数量
HCY™ BloodDirect Taq Polymerase	500U/tube 5U/ul	E0062P01	1管
10×HCY™ BloodDirect PCR Buffer (with Mg2+)	1ml/tube	E0062B01	1管

【保质期】
12个月

【保存条件】
长期存放请置于-20℃避光保存。如需频繁使用，可分装后存放于4℃，避免反复冻融。解冻后应充分混匀，避免产生大量气泡。

【产品简介】
HCY™ BloodDirect PCR Kit是一款可直接对全血样本进行PCR扩增，无需进行DNA纯化或样本预处理的试剂盒。可用于直接扩增含 EDTA、肝素、柠檬酸盐等常规抗凝剂的新鲜血液、冷藏（冻）血液及 Whatman903®和 FTA®商用干血渍。试剂盒中含有经过基因工程改造Blood direct DNA Polymerase，该酶对全血样品中PCR抑制剂具有超强的抵抗力。

【来源】
本Taq DNA Polymerase为Recombinant Taq DNA Polymerase，经过基因突变与重组改造，通过大肠杆菌表达纯化获得。

【活性定义】
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在 74℃，30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

【适用范围】
不同类型的全血样本直接PCR反应。

【注意事项】
1.推荐血液模板使用量为反应总体积的10%，即50ul的反应体系内加入5ul全血；
2.吸取抗凝血时，应尽量避免吸取血液凝块；
3.延伸时间按30sec/kb设定，如不足15sec，设置15sec即可；
4.PCR反应完成后，推荐反应液于4000rpm（1000×g）离心1-3min以沉淀细胞碎片，之后取上清进行下游分析。

【PCR反应体系】

组分	50ul体系 （ul）	终浓度
血液样本	*	*
引物1	1-5	0.2-1.0μM
引物2	1-5	0.2-1.0μM
dNTP Mix(各10mM)	1	200μM
HCY™ blood Buffer with Mg²+	5	1×
HCY™Blood direct DNA Polymerase	1-2
灭菌水	up TO 50 ul

a. 使用前请充分混匀各组分。
b. 推荐每条引物的使用终浓度为0.4μM，过高会导致非特异性扩增。
c. 最佳全血模板浓度范围为0.5%-20%，推荐使用量为10%作为初始尝试条件，即50μL反应体系中加入5μL全血作为模板， 注意避免吸取血液凝块。对于贮存在Whatman®滤纸卡上的干血渍，则可取约1 mm2 带血渍的圆纸片，无需进行预处理，直接放入PCR反应液中即可进行扩增。

【PCR反应条件】
以扩增 1 kb的DNA片段为例：
95℃ 5 min
95℃ 15 sec
60℃ 15 sec 35个循环
68℃ 30 sec
68℃ 5 min

a. 预变性（95℃，5min）可以让白细胞裂解，释放可用于PCR扩增的基因组DNA,请勿缩短时间或降低温度。
b. 一般来说，退火温度设置为引物Tm值即可。然而，使用高的退火温度可以有效减少非特异性扩增，并提高全血模板的扩增效率。因此，如扩增产物特异性较差，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板最适退火温度。推荐退火时间设置为15 sec即可。
c. 延伸时间按30 sec/kb设定，如不足15 sec，设置15 sec即可。超过5 kb片段扩增时，如发现扩增效率较低，可适当延长延伸时间至60 sec/kb。

【扩增产物分析】
PCR完成后，建议将反应液于4,000 rpm(1,000 × g)离心1 – 3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清液进行下游分析。该步骤可有效去除多种血液组分。当使用高浓度血液模板时此步尤为重要，因为经过PCR循环，反应管中会存在大量的血细胞碎片。这些碎片会干扰下游的检测，如琼脂糖电泳检测。

【质量控制】
1.SDS-PAGE电泳纯度大于98%；
2.功能检测：PCR的敏感性、特异性、可重复性；
3.无外源核酸酶活性，无外源内切、外切核酸酶污染；
4.无表达宿主核酸残留。

.注意：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的医疗或诊断程序，不能使用本产品作为食品、化妆品或家庭用品等。未经书面许可授权或批准，不得制造、许诺销售、销售或进出口本产品，或者使用产品所有的相关专利及相关商标。

【基本信息】
生产企业名称：深圳市华晨阳科技有限公司
生产地址：广东省深圳市宝安区新桥街道黄埔社区上南东路128号4号厂房八层
售后服务单位名称：深圳市华晨阳科技有限公司
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